PROSES PEMBUATAN PLASMID REKOMBINAN pPIC9K-KEX2 PADA BAKTERI ESCHERICHIA COLI UNTUK KO-EKSPRESI KE DALAM RAGI PICHIA PASTORIS

Paten

PROSES PEMBUATAN PLASMID REKOMBINAN pPIC9K-KEX2 PADA BAKTERI ESCHERICHIA COLI UNTUK KO-EKSPRESI KE DALAM RAGI PICHIA PASTORIS

Proses pemembuatan plasmid rekombinan pPIC9K-KEX2 pada bakteri E.coli untuk ko-ekspresi ke dalam ragi Pichia pastoris. Invensi ini bertujuan untuk menyediakan proses pembuatan plasmid rekombinan pPIC9K-KEX2 menggunakan bakteri E. coli yang akan digunakan untuk meningkatkan level ekspresi human insulin glargine (hIG) pada ragi Pichia pastoris. Tahapan-tahapan proses pembuatan plasmid rekombinan tersebut menurut invensi ini yaitu: membuat desain primer yang akan digunakan pada proses isolasi KBT menggunakan metode PCR dan isolasi KBT kex2 dari sel ragi P. pastoris galur GS115. urutan sepasang primernya adalah KEX2-Fw-BamHI:5’GGG GGG GAT CCA TGT ATT TGC CAG CAC TT-3’ dan KEX2-REV-EcoRI: 5’GGG GGG AAT TCT TAC AAT GCC GCA CGT TT-3’. Selanjutnya melakukan konstruksi pPIC9K-KEX2 P. pastoris dengan tahapan sebagai berikut: menggunakan kanamisin sebagai antiobiotik untuk menseleksi bakteri rekombinan target. Insert DNA, gen kex-2 Pichia pastoris, dimasukkan ke dalam plasmid pPIC9K pada situs unik BamHI dan EcoRI. Dengan konstruksi seperti ini maka insert akan in frame dengan signal peptide α factor dibawah kendali promotor AOX1. Dari proses tersebut di atas diperoleh plasmid rekombinan yang telah mengandung KBT kex2.

P00202304974

06 Juni 2023

2023

2022-1669085359-ftb7

B-4423/III.5.1/HK.00/11/2022


( Lihat )

Pusat Riset Rekayasa Genetika

neng.brin@gmail.com

Badan Riset dan Inovasi Nasional

-- Lihat Semua Jenis Paten --

Bioteknologi

2

0

-

  • Neng Herawati
    ( Pusat Riset Rekayasa Genetika )
  • Desriani
    ( Pusat Riset Rekayasa Genetika )
Kembali